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CE-SDS纯度检测试盒产品介绍

更新时间:2023-08-24      浏览次数:252

CE-SDS纯度检测试盒产品介绍

 

产品信息

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蛋白质的分子大小变异体检测是蛋白质生产过程中至关重要的检测指标,CE-SDS法检测广泛应用在包括单抗在内的各种蛋白质纯度检测中。CE-SDS纯度检测试剂盒是经过验证的灵敏度、准确度、性价比、质量标准更高的国产化新型检测试剂盒试剂盒中包含优化的SDS样品缓冲液A(PH=9.0)SDS样品缓冲液B(PH=6.5)[1]涂层毛细管、优化的凝胶缓冲液(保密配方)、内控标准品、酸碱冲洗液等试剂及耗材。经过验证,试剂盒可广泛应用于蛋白质还原及非还原CE-SDS纯度检测,并且可在市面上常见毛细管电泳系统中使用。

 

[试剂盒成分信息]试剂盒储存条件

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注意:

凝胶缓冲液或者SDS样品缓冲液在使用之前,若注意到试剂瓶底部有沉淀,需室温搅拌或者超声波超声直至试剂瓶中缓冲液溶解后方可使用。在吸取缓冲液进毛细管电泳系统进样之前,缓冲液需保证在室温中放置至少4小时。

2.蛋白分子量标准品信息

蛋白分子量标准品包含14.3,29.0,44.2,55.0,6.4,105150KD的蛋白质,CE-MW蛋白质分子量测定实验,该产品不包括在试剂盒中,需单独采购。

3.内控标准品信息

14.3KDa的蛋白质作为迁移标记物,用于蛋白样品相对于内标的相对迁移来计算分子量,可获得更准确的分子量结果和鉴定信息。另外,内控标准品可作为常规蛋白纯度检测内标,用于校准出峰时间。

[样品处理]

1.蛋白分子量标准品制备

(1)非还原模式

用样品缓冲液溶解稀释蛋白分子量标准品,使蛋白的终浓度0.2-2mg/ml之间,总体积95ul。加入5ulN-乙基马来酷亚胺(NEM)溶液。盖好瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀,离心机6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。

(2)还原模式

用样品缓冲液溶解稀释蛋白分子量标准品,使蛋白的终浓度在0.2-2.0mg/mL之间,总体积为95uL。加入5ul2-琉基乙醇,盖上瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀,离心6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。

2.蛋白样品预处理

蛋白样品的脱盐:信号强度和分离度对于蛋白中盐的浓度十分敏感,如果蛋白样品浓度低于10mg/ml并且缓冲液盐的终浓度高于50mM,样品的进样效率就会降低以下是使用超滤法对样品的脱盐步骤。

向超滤离心管中加入1mL蛋白样品,再加入1mLSDS样品缓冲液。7000g离心20min。再加入2 mL样品缓冲液,7000 g离心20 min。上下颠倒超滤离心管使上层溶浓在滤膜作用下滤到新的小瓶中,并在5000g下离心3min。将蛋白样品转移到样品管中,加入样品缓冲液使终量为1mL

3.蛋白样品的浓度

保证在加入SDS样品缓冲液后,蛋白的浓度在0.2-2.0mg/mL之间,推荐最佳蛋白浓度为1mg/mL。如果蛋白浓度过高,与蛋白结合的SDS就会不足,导致峰变宽而且分辨率降低;如果蛋白浓度过低,信号就会相应变低。

4.非还原样品处理

对比一个蛋白的还原和非还原状态可以得到一些结构信息,通过烷基化蛋白样品口以减少由于蛋白自动还原产生的蛋白异质性。以下是配制非还原蛋白样品的过程

(1)   烷基化试剂的制备

使用100mM N-乙基马来酷亚胺(NEM)800 mM碘酷胺(AM)作为烷基化试剂[2]3.加入蛋白质和分析样品中后分别稀释20倍至终浓度5 mM40 mM

a)称取12.5mgNEM148mglAM置于1.5mL离心管中。

b)加入1000ul超纯水,盖好瓶盖并充分混合并标记。2-8°C避光保存,有效期5

(2)样品的制备

用样品缓冲液溶解稀释样品,使蛋白的终浓度0.2-2mg/ml之间,总体积95ul。加入2ul的内标。加入5ulN-乙基马来酷亚胺(NEM)溶液。盖好瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀,离心机6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。

5.还原样品处理

用样品缓冲液溶解稀释样品,使蛋白的终浓度在0.2-2.0mg/mL之间,总体积为95uL加入2ul的内标。加入5ul2-琉基乙醇,盖上瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀,离心机6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。

 

 


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